Masson三色染色是結(jié)締組織染色中經(jīng)典的一種方法，又稱馬松染色，是顯示組織中纖維的主要方法之一，是膠原纖維染色而經(jīng)典的技術(shù)方法。

  Masson染色

該法染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關(guān)，分子的大小由分子量來體現(xiàn)，小分子量易穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的組織；而大分子量則只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)疏松的、滲透性高的組織。然而，淡綠或苯胺藍(lán)的分子量都很大，因此Masson染色后肌纖維呈紅色，膠原纖維呈綠色或藍(lán)色，主要用于區(qū)分膠原纖維和肌纖維。

 病理診斷意義

（1）器官硬化性疾病的觀察：如肝硬變、心肌瘢痕的觀察，膠原染色更易于觀察診斷。

（2）瘢痕與淀粉樣物質(zhì)鑒別：前者膠原纖維染色為陽性，后者為陰性。

（3）骨纖維異常增殖病與骨纖維化的鑒別：利用膠原纖維染色可較易觀察前者膠原纖維紊亂，縱橫交錯，后者較規(guī)則。

樣本要求：組織片充分固定和脫蠟。

 實驗步驟

1.石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ10min-無水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗。

2.蘇木素染細(xì)胞核：masson染色試劑盒內(nèi)Weigert氏鐵蘇木素染5min，自來水洗，1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來水沖洗，流水沖洗數(shù)分鐘返藍(lán)。

3.麗春紅染色：masson染色試劑盒內(nèi)麗春紅酸性品紅液染5-10 min，蒸餾水快速漂洗。

4.磷鉬酸處理：masson染色試劑盒內(nèi)磷鉬酸水溶液處理約3-5 min。

5.苯胺藍(lán)染色：不用水洗，直接用masson染色試劑盒內(nèi)苯胺藍(lán)液復(fù)染5min。

6.分化：1%冰醋酸處理1min。

7.脫水封片：將切片依次放入95%酒精I(xiàn) 5min -95%酒精I(xiàn)I 5min-無水乙醇Ⅰ5min -無水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片。

8.顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。