血清白蛋白，即Serum albumin，?？s寫為ALB。血清白蛋白合成于肝臟，是脊椎動(dòng)物血漿中含量zui豐富的蛋白質(zhì)。不同來源的血清白蛋白的氨基酸序列及其空間結(jié)構(gòu)非常保守，它具有結(jié)合和運(yùn)輸內(nèi)源性與外源性物質(zhì)的性質(zhì)，維持血液膠體滲透壓，清除自由基，抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能。在生命過程中有著重要的意義。

在測(cè)定時(shí)使用什么方法是效的呢？不如我們來試試溴甲酚紫法！

溴甲酚紫法是由國(guó)外推出而引進(jìn)中國(guó)的，此方法主要就是用來測(cè)定血清白蛋白，首先我們從材料講起！

a,儀器與試劑 DADE BEHRING Dimension RXL型與Dimension RXL密閉ALB試劑(批號(hào)EJ2235)；OLYMPUS AU800型全自動(dòng)生化分析儀、日本W(wǎng)AKO ALB試劑(批號(hào)DJ326)。ALB標(biāo)準(zhǔn)品 采用Dimension TP/ALB Calibrator(批號(hào)1GD024)和Olympus System Calibrator(批號(hào)105E)；質(zhì)控品采用美國(guó)DADE Moni-Trol Chemistry Control(批號(hào)EM2-0312)。

b,原理 在pH4.9醋酸鹽緩沖液中，溴甲酚紫與白蛋白結(jié)合形成綠色復(fù)合物，在600nm波長(zhǎng)處的吸光度與白蛋白濃度成正比，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可計(jì)算樣品血清中的白蛋白濃度。 

c,方法 取Dimension TP/ALB Calibrator的中間水平42g/L作標(biāo)準(zhǔn)，以兩管去離子水作為0 g/L的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)RXL進(jìn)行假三點(diǎn)定標(biāo)，隨后測(cè)定83 g/L、72.63 g/L、62.25g/L、55.33g/L、42g/L 28g/L、21g/L、14g/L、10.5g/L、5.0g/L共十個(gè)濃度的ALB標(biāo)準(zhǔn)溶液及其吸光度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；收集30ml新鮮混合血清用Dimension RXL進(jìn)行批內(nèi)和批間精密度試驗(yàn)。另收集100份門診就診者血清，用System Calibrator對(duì)AU800的ALB進(jìn)行定標(biāo)后，兩臺(tái)生化分析儀同時(shí)進(jìn)行ALB檢測(cè)。

2結(jié)果
a,標(biāo)準(zhǔn)曲線 用RXL全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)上述十個(gè)不同濃度的ALB標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度，以ALB濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線。結(jié)果表明ALB濃度在5.0~83g/L之間，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為1.000，回歸方程式：y=0.234X-11.588。
b,精密度 收集30ml新鮮混合血清(無明顯溶血、脂血、黃疸者)，分成60份，取30份上RXL連續(xù)分析，求得 =42.76g/L，SD=0.418，批內(nèi)變異系數(shù)為0.95%；另30份混合血清樣品置-20℃冰箱冷凍保存，每日早晚各測(cè)定一次，共計(jì)15d ，測(cè)得其 =41.92g/L，SD=1.27，批間變異系數(shù)為3.03%。
c,回收率 取一份新鮮血清分裝為4管，每管900μl，RXL測(cè)定其中1管ALB濃度為39.70g/L，另3管分別加入14g/L、42g/L、83g/L的ALB標(biāo)準(zhǔn)液100μl，測(cè)得回收濃度分別為1.36 g/L、4.30 g/L和8.20 g/L，回收率分別為97.1%、102.4%和98.8%，平均回收率為99.4%。
d,干擾試驗(yàn) 取一份新鮮血清，測(cè)定其ALB為41.2g/L。將膽紅素純品配成378μmol/L的溶液，將血清樣品與膽紅素溶液按9:1、2:1、1:1、1:2的比例進(jìn)行混合，然后測(cè)定ALB含量。結(jié)果表明，252μmol/L的膽紅素對(duì)BCP法測(cè)定ALB無影響。血清樣品與20%的Trilitid按6:1、4:1、3:1混合，結(jié)果顯示，Trilitid濃度為2.9%和4.0%時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果無明顯影響，濃度達(dá)5%時(shí)會(huì)產(chǎn)生7.76%的正干擾。溶血標(biāo)本血紅蛋白≤4.0g/L時(shí)對(duì)測(cè)定無明顯干擾。
e,顯色穩(wěn)定性 ALB可與BCP進(jìn)行即時(shí)*反應(yīng)，不受時(shí)間和溫度變化的影響，反應(yīng)后吸光度可穩(wěn)定1h以上。
f,方法對(duì)比試驗(yàn) 用本法(X)和BCG法(Y)分別測(cè)定100份門診就診者血清ALB，經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理，其回歸方程為y=1.08x+5.98，r=0.929，經(jīng)SPSS軟件統(tǒng)計(jì)其F=364.84，P<0.001，兩種方法測(cè)定結(jié)果顯著相關(guān)。將兩種方法測(cè)定100份樣品的結(jié)果進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，t=38.29，P<0.001，兩種方法測(cè)定的結(jié)果有顯著性差異。但將BCP法的測(cè)定結(jié)果經(jīng)回歸方程換算后，兩法結(jié)果非常接近。
g,正常參考值 用BCP法測(cè)定120名健康成人血清ALB含量，其中男性65例，女性55例，年齡18~50歲，結(jié)果( ±s)為(41.5±3.75)g/L，參考值范圍( ±2s)：34~49g/L。與國(guó)外人群的參考值范圍35~50g/L相近。
3討論
傳統(tǒng)的溴甲酚綠法測(cè)定血清白蛋白會(huì)受到非白蛋白類蛋白質(zhì)的非特異性干擾，而BCP試劑的zui適pH值為5.20，接近a-和b-球蛋白的等電點(diǎn)，能抑制這兩種球蛋白與BCP的非特異性反應(yīng)，因此對(duì)測(cè)定白蛋白具有更高的特異性。本試驗(yàn)的結(jié)果表明，BCP法測(cè)定血清ALB的精密度較好，回收率高，線性范圍可達(dá)10~80g/L，比傳統(tǒng)的BCG法更寬，而且不易受溶血、黃疸和脂血等臨床常見干擾因素的干擾。
BCP和BCG這兩種方法測(cè)定ALB結(jié)果的差異，不同的研究者對(duì)不同人群檢測(cè)的結(jié)果不盡相同。Blagg等認(rèn)為，采用溴甲酚綠長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間測(cè)定法檢測(cè)健康人血清白蛋白的差值可比溴甲酚紫法高11g/L。與標(biāo)準(zhǔn)的電免疫測(cè)定法(eletroimnunoassay)相比，采用BCG短反應(yīng)時(shí)間法測(cè)定的非shenbing病人血清ALB會(huì)偏高7g/L，shenbing病人則偏高8g/L。Joseph則認(rèn)為，BCG法測(cè)定ALB與散射比濁法的結(jié)果較一致，而BCP法比BCG法測(cè)定結(jié)果偏低5.2g/L；行血液透析的病人比腹膜透析者偏低更嚴(yán)重。Clase等則認(rèn)為BCP法測(cè)定shenbing與非選擇性患者、血液透析與其他shenbing患者血清ALB的表現(xiàn)一致，比BCG法約偏低5.5g/L，這一觀點(diǎn)與Joseph相反。Blagg等的研究表明，BCP法比BCG法偏低5g/L。zui近，Carfray認(rèn)為，BCP法測(cè)定血透病人ALB的結(jié)果與"金標(biāo)準(zhǔn)"的散射比濁法結(jié)果更接近，BCG法測(cè)定ALB結(jié)果偏高(尤其是高白蛋白血癥患者偏高更為顯著)，通常比BCP高3.5g/L。
因?yàn)槿狈晒┍容^的"金標(biāo)準(zhǔn)"，本試驗(yàn)的結(jié)果并不能說明BCG的結(jié)果偏高、BCP結(jié)果偏低，抑或兩者皆有。國(guó)外學(xué)者的觀點(diǎn)也不盡相同，Joseph等認(rèn)為BCG法更接近"金標(biāo)準(zhǔn)"，而Blagg、Carfray等卻認(rèn)為BCP法更佳，這也許與各自所采用的標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。在短時(shí)間內(nèi)，大家不可能接受單一的測(cè)定ALB的方法為zui終標(biāo)準(zhǔn)方法，更不可能在臨床上都應(yīng)用那一種方法。這兩種方法在臨床上都廣為應(yīng)用，盡管有人提出放棄BCG法，但這種觀點(diǎn)并未被普遍接受，BCP法的人源質(zhì)控血清和技術(shù)轉(zhuǎn)換在一定時(shí)間內(nèi)仍存在一定的困難。因此，BCP和BCG這兩種測(cè)定ALB的方法在相當(dāng)一段時(shí)間內(nèi)仍將共存。
本試驗(yàn)的目的不是幫助選擇哪一種更好的方法，而是為了解決臨床和科研工作中的一個(gè)實(shí)際問題，即如何比較分析不同方法測(cè)得的ALB結(jié)果。我們的試驗(yàn)結(jié)果表明，用BCP和BCG兩種方法測(cè)定100份門診患者血清ALB的結(jié)果有顯著性差異(P<0.001)，但高度相關(guān)(r=0.929)。BCP法比BCG法低5.98g/L(以BCG法為Y，BCP法為X，兩法測(cè)定結(jié)果的回歸方程為y=1.08x+5.98)，與上述多位國(guó)外研究者的結(jié)果非常相近。將近年來推出的BCP法的測(cè)定結(jié)果按y=1.08x+6作一個(gè)簡(jiǎn)單換算，即可預(yù)測(cè)BCG法的測(cè)定結(jié)果，效果非常令人滿意。